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Evita la concentración de muestras para el análisis de colifagos somáticos en 100 mL
El kit BP1604 ha sido diseñado para facilitar el análisis de colífagos somáticos con el fin de evitar el paso de concentración, que además de generar pérdidas, requiere de un esfuerzo en personal cualificado.
El actual Real Decreto (RD 3/2023) del 10 de enero de 2023 y la directiva europea (EU 2020/2184) por los que se establecen los criterios técnico-sanitarios de la calidad del agua de consumo, su control y suministro, incorporan el análisis de los colífagos somáticos como indicadores víricos de calidad. Este hecho contribuye significativamente a la mejora de la calidad microbiológica del agua, ya que durante más de 100 años los parámetros microbiológicos aplicados se han basado principalmente en indicadores bacterianos. La incorporación de los colífagos somáticos contribuye a la mejora de la prevención y a disminuir riesgos causados por la presencia potencial de virus, no garantizada por la ausencia de los indicadores bacterianos.
Este nuevo parámetro debe valorarse para un volumen de 100 mL de muestra, y ambas normativas indican claramente que se aplicarán dos métodos El método ISO 10705-2Calidad del agua. Detección y recuento de bacteriófagos. Parte 2: Recuento de colífagos somáticos establece la metodología de análisis para un volumen de muestra de entre 1 y 5 mL. Evidentemente, se pueden realizar 20 réplicas de 5 mL de la misma muestra hasta procesar los 100 mL requeridos y sembrarlas en placas de Petri de 140 mm. Esta opción conlleva unos costes de materiales y de recursos humanos importantes. Por ello, las normativas indican la aplicación del método ISO 10705-3 Calidad del agua. Detección y recuento de bacteriófagos. Parte 3: Validación de métodos para la concentración de bacteriófagos en agua. Este método ISO indica cómo un usuario o laboratorio debe demostrar que su método de concentración es válido siguiendo los análisis numéricos que se detallan en dicha ISO.
El usuario puede adaptar alguno de los métodos de concentración que indica la ISO 10705-3 en sus anexos, pero ello no le exime de demostrar la validez de su método desarrollado o adaptado. Evidentemente, el método de concentración utilizado por un laboratorio o analista deberá acreditarse siguiendo las indicaciones de esta ISO 10705-3 ante la autoridad o agencia competente en acreditación.
Debe tenerse en cuenta que, como cualquier otro método, el protocolo de concentración tiene una recuperación asociada y que ésta dependerá de factores tan diversos como el tipo de concentración, el origen de los componentes de los medios y de las soluciones de extracción o elución y las características fisicoquímicas de la muestra.
Esta concentración previa de las muestras antes de aplicar la ISO 10705-2 se requiere normalmente para el análisis de aguas con niveles bajos de colífagos somáticos. En cambio, si se analiza un volumen de 5 mL de un agua de este tipo mediante el método 10705-2, sin realizar la concentración previa, entonces la sensibilidad del método (límite de detección) es de 20 UFP/100 mL, no se detectarán colífagos somáticos presentes en la muestra a niveles inferiores a este valor y, por lo tanto, no se podrá asegurar la ausencia de este indicador vírico por ejemplo en aguas de consumo, donde se requiere ausencia de colífagos somáticos en 100 mL de muestra.
Además, la exactitud y la precisión del método se ven afectadas también por el efecto de distribución no homogénea de una concentración tan baja en una solución (distribución de Poisson), efecto que debe tenerse siempre en cuenta en un análisis microbiológico de muestras ambientales. Si un laboratorio no ha acreditado debidamente su procedimiento de concentración de esta manera no resulta aconsejable su servicio para el análisis de aguas de consumo, ya que no permite ajustarse al límite de detección que se requiere en las normativas y regulaciones actuales.
Las técnicas de concentración pueden presentar reducciones de recuperación importantes, de manera que deriven en una menor sensibilidad del método cuando se realizan los cálculos después de enumerar la elución mediante la ISO 10705-2. Pueden alcanzarse niveles de recuperación de entre el 40 y el 80% mediante algunas técnicas validadas (Méndez et al. 2004) y (IELAB, 2022).
El kit BP1604 ha sido diseñado para facilitar el análisis de colífagos somáticos con el fin de evitar el paso de concentración, que además de generar pérdidas, requiere de un esfuerzo en personal cualificado. Este kit, ideal para aguas de baja concentración, permite analizar completamente los 100 mL de la muestra que requieren las normativas actuales, ya que se realiza el análisis de todo el volumen utilizando 5 placas de Petri de 140 mm, evitando así las reducciones que ocasionan los métodos de concentración y proporcionando el valor total de colífagos somáticos presentes en los 100 mL. Este método presenta un límite de detección de 1 PFU/100 mL y no existen pérdidas de colífagos como siempre ocurre tras aplicar cualquier método de concentración (IELAB, 2022).
Referencias:
IELAB (2022) Estudio comparativo: kit de recuento de colifagos somáticos (BLUEPHAGE® Cat. No. BP1604) frente a procedimiento de ensayo de referencia basado en 10705-2.
Méndez, J.; Audicana, A.; Isern, A.; Llaneza, J.; Moreno, B.; Tarancón, M.L.;, Jofre, J.; Lucena, F. (2004) Standardised evaluation of the performance of a simple membrane filtration-elution method to concentrate bacteriophages from drinking water. J Virol Methods 117(1): 19-25.
